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  • 產品分類
    聯系方式
    • 上海滬崢生物科技有限公司
    • 聯系人:李小姐
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    貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)
    物品單位 價格 品牌
    千克 1380 上海滬崢
    • 產地:國內
    • 貨號:HXG731
    • 發布日期: 2021-03-29
    • 更新日期: 2023-02-17
    產品詳細說明
    產地 國內
    品牌 上海滬崢
    貨號 HXG731
    用途范圍 僅限科研
    純度 詳詢客服%
    CAS編號
    規格 50T/盒
    是否進口


    產品名稱:貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)
    包裝:50T
    用途:本產品僅供科研與實驗使用,不用于臨床診斷等
    目的:本試劑盒適用于檢測疑似感染者或發病動物等組織、體液或淋巴結等標本中禽流感病毒rna,用于禽流感病毒感染的輔助診斷,其檢測結果僅供參考。
    貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。

    鹿源性成分(Deer)試劑盒(熒光-PCR法)PCR 管中加入下列成分:

    成份

    樣品

    陽性對照

    陰性對照

    雙酶一管式 RT-PCR Buffer,

    15 uL

    15 uL

    15 uL

    EMCV 專一性引物對

    2 uL

    2 uL

    2 uL

    樣品 RNA

    1-5 uL

    2 uL

    EMCV 陽性對照

    2 uL

    補超純水到

    28 uL

    28 uL

    MMLV-Taq Mix

    2 uL

    2 uL

    2 uL

    鹿貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)操作步驟

    取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g,手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨,待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中, 8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 1.5mL 滅菌離心管中。

    DNA 提取

    樣本 DNA 的提取采用 DNA 取試劑盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。試劑配制(試劑準備區)根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 10 份,多配制 1 ),每測試反應體系配制如下表:

    試劑

    Duck 反應液

    酶液

    用量

    20μL

    1μL

    加樣(樣本處理區)將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。


    PCR 擴增(核酸擴增區)

    4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

    4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25ul;熒光通道選擇: 檢測通道

    Reporter Dye)FAM, 淬滅通道Quencher Dye)NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。

    4.3 推薦循環參數設置:

    步驟

    循環數

    溫度

    時間

    收集熒光信號

    1

    1 cycle

    95℃

    10min

    2

    40 cycles

    94℃

    15sec

    55℃

    30sec

    結果分析判定設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出


    現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline start (一般可在 3~15 范圍內調節)、stop (一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold Value (上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

    判斷a) 檢測通道 Ct ≤30,有 FAM 熒光信號檢出,并出現典型的擴增曲線,判斷樣品為陽性。

    b) 30≤35 時,且有典型的擴增曲線時,則需重復實驗。再次擴增后檢測體系的Ct 值仍≤35,且有典型的擴增曲線,則判定該樣品含有相應的動物源性成分。當再次擴增后,檢測體系 Ct 值>35,或無典型的擴增曲線,則判定該樣品不含相應的動物源性成分。

    質控標準

    a) 空白對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct ≥35,未出現典型的擴增曲線。

    b) 陰性對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct ≥35,未出現典型的擴增曲線。

    c) 陽性對照:有 FAM 熒光信號檢出,并出現典型的擴增曲線,Ct 值<30。

    d) 以上應同時滿足,否則本次實驗無效。


    需要注意*:

    PCR反應液請在冰中配制,然后置于PCR反應儀上進行PCR反應。這種冷啟動法(Cool Start Method)與熱啟動法(Hot Start Method)相結合,更能有效地減少PCR過程中的非特異性反應,增強PCR擴增的特異性,能得到良好的PCR結果。

    PCR的反應條件:

    因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。

    ◇ 循環次數

    根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。

    如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。


    貂源性成分(Martes)試劑盒(熒光-PCR法)特點

    1,嚴格的質控體系:所有試劑盒從原料到成品經過嚴格的質控,確保試劑盒質量及穩定性

    2,產品不斷優化,很好的靈敏度;

    3,綜合指標特性,研發便捷操作的試劑盒;

    4,檢測驗證樣本多樣;

    5,專業的研發團隊為客戶提供個性化的定*務;

    6,提供食品安全藥物殘留Elisa試劑盒,以及快檢試劑盒

    7,完善專業的售前售后服務




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