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    聯系方式
    • 上海滬崢生物科技有限公司
    • 聯系人:李小姐
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    雞傳染性貧血病毒PCR檢測試劑盒
    物品單位 價格 品牌
    2380 上海滬崢
    • 產地:國內
    • 型號:50T/盒
    • 貨號:HZT2455
    • 發布日期: 2021-03-25
    • 更新日期: 2023-02-07
    產品詳細說明
    產地 國內
    品牌 上海滬崢
    貨號 HZT2455
    用途范圍 僅用科研
    純度 詳詢客服%
    CAS編號
    規格 50T/盒
    是否進口


    基本原理 先用隨機引物將 RNA 反轉錄成 cDNA,然后設計特異性的引物和熒光探針(TaqMan 探針),進行 熒光定量 PCR 檢測。TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它設計為與目標序列上游引物和下游引物 之間的序列配對。熒光基團連接在探針的 5’末端,而淬滅劑則在 3’末端。當完整的探針與目 標序列配對時,熒光基團發射的熒光因與 3’端的淬滅劑接近而被淬滅,但在進行延伸反應時, qTaq 聚合酶的 5’外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離,熒光強度得到檢測。 隨著擴增循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累,因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。


    試劑盒準備物品
    清理液(A)                                    毫升
    染色液(t B)                                  微升
    稀釋液(C)                                    毫升
    溶解液(tD)                                   毫升
    產品說明書                                       1份
    反應五要素
    參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
    引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
    ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
    ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
    ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
    ④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
    ⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
    ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
    ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

    引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

    病毒PCR檢測試劑盒注意事項

    注意事項:

    1. 試劑盒各組份使用前請充分融化并搖勻,離心管內的試劑需離心數秒后使用。 2 PCR操作各階段應在不同實驗室進行。

    3 在試劑和標本準備階段使用負壓超凈臺。

    4 應穿工作服,戴一次性手套(經常替換手套),使用一次性用品。

    5 PCR操作人員應具有經驗和受過培訓。

    6操作過程中用到的超凈臺、移液器、離心機、擴增儀等儀器設備應經常用10%次氯酸或70%乙醇或 紫外燈處理。

    7 陽性對照應和待檢標本平行進行操作后方可進行PCR擴增。






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