用于RNAi的慢病毒包裝簡要程序

發布時間： 2020-03-18   

以六孔板中的1孔為例，每個樣品需要1×10∧6個293FT細胞。
1、取1.5ml滅菌EP管，加入1.5μg包裝混合質粒和0.5μg表達質粒以及250μl的無血清Opti MEM。輕柔混勻，室溫孵育5min。
2、取1.5ml滅菌EP管，取9μl 脂質體2000l溶于250μl無血清Opti-MEM I培養基中。輕柔混勻，室溫孵育5min。
3、將DNA溶液和脂質體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min
4、用胰酶消化并記數293FT細胞。用含血清的DMEM培養基重懸細胞。
5、在六孔板中每孔，加入1ml含血清的生長培養基，再加入DNA-脂質體復合物。
6、將1ml重懸的293FT細胞（1×10∧6個細胞/ml）加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育過夜。
7、移除含有DNA-脂質體復合物的培養基移除，代之以DMEM（含丙酮酸鈉和非必須氨基酸）。
7、轉染后48-72h收獲含病毒的上清。3000 rpm 離心20min，去除沉淀。
8、病毒上清-80°C貯存。
包裝出來的慢病毒對NIH/3T3細胞達90%以上感染效率。